Le chromatogramme du Prozac (antidépresseur) a été enregistré dans les conditions suivantes :

HPLC.  Colonne C18: 15cm x 4.6mm
Phase mobile: acetonitrile / 25mM KH₂PO₄   pH 7.0 (40:60)
Débit: 2mL/min.  Température: 30°C
Détecteur UV : 254 nm .   Injection: 1µL 

                                                     

                                                                      Chromatogramme du Prozac

Le temps de rétention.

Le temps de rétention tr d'un produit S est le temps écoulé entre le début de l'injection et la sortie du produit. (pour le chromatogramme 2, tr = 3 mn)

tr dépend du produit S et des conditions expérimentales (colonne, température, débit de phase mobile... etc.)

Le volume de rétention

Le volume de rétention Vr correspond au volume de phase mobile nécessaire pour éluer le produit S. Si D est le débit de la phase mobile (D supposé constant) :

 Vr = tr * D.            (pour le chromatogramme 2, Vr = 3*2 = 6 ml)

Le   temps mort.

Le  temps mort tm est le temps que met la phase mobile pour traverser la colonne. (dans la figure 2, tm = 1mn)

La phase mobile est caractérisée par sa vitesse linéaire u de déplacement dans la colonne de longueur L, on a :

         u  = L / tm  (pour le chromatogramme 2, u  = 15 cm/mn)

En CPG, le temps mort correspond au temps de rétention de substances non retenue par la phase stationnaire comme l'air ou le méthane.

Le  volume  mort.

On appelle volume mort Vm le volume de phase mobile qui passe à travers la colonne pour aller d'une extrémité à l'autre de la colonne (pendant le temps tm). Autrement dit, Vm est le volume occupé par la phase mobile dans une colonne.

           Vm  = tm * D.      (pour le chromatogramme 2, Vm = 1*2 = 2 ml)

Vm ne dépend que de la géométrie et du remplissage de la colonne.

Volume et temps de rétention réduits

On appelle volume de rétention réduit V'r, la différence entre les termes Vr et Vm.

            V'r = Vr - Vm             (pour le chromatogramme 2, V'r =  4 ml)

Le volume de rétention réduit correspondant au  produit S  est le volume de phase mobile qui doit passer à travers la colonne pour éluer le composé S.

De la même façon, on définit un temps de rétention réduit t'r.

            t'r = tr - tm                 (pour le chromatogramme 2, t'r =  2 mn)        

Les volumes et temps de rétention réduits sont indépendants des volumes et temps morts, elles dépendent donc moins de l'instrumentation (de la colonne).