Avec Cs la concentration du soluté dans la phases stationnaire
Avec Cm la concentration du soluté dans la phase mobile
Facteur de séparation ou de rétention
Il définit la position relative de 2 pics, le pic du soluté a sortant avant le pic du soluté b:
Il est égal à a(alpha) = t'R(a)/t'R(b)
Facteur de résolution
Il définit la plus ou moins bonne séparation de deux solutés :
R = 2(tR(a)-tR(b)) / (ωa+ ωb)
Pour des valeurs de R supérieures à 1,5, les pics sont correctement séparés.
Dosage par chromatographie
Principe du dosage
La surface du pic est proportionnelle à la quantité de produit élué. Cela se traduit par la relation :
mi = KiAi
Avec - mi : la masse du composé i injectée
- Ai l’aire du pic du composé i
- Ki le coefficient de proportionnalité
Si la masse de soluté injecté est connu, la méthode de la normalisation externe peut-être utilisée.
Si l'on ne connait pas avec précision le volume injecté, il faut faire appel à différentes méthodes de dosage :
- méthode des ajouts dosés
- normalisation interne
- l'étalon interne.
Dosage par la méthode des ajouts dosés
Principe de la méthode des ajouts dosés
Soit un mélange de 3 composés ayant des masses respectives m1, m2, m3. Le dosage consiste à ajouter une masse m0 du composé à doser au mélange. Pour chacun des composés l'on a : xi = mi/∑ mi = KiAi / ∑ KiAi
Exemple : on cherche à déterminer la fraction massique x2 du mélange. Soit :
- m0 : la masse de produit 2 ajouté au mélange
- A1 et A2: les aires respectives des composés 1 et 2 avant l’ajout de m0 - A’1 et A’2 : les aires respectives des composés 1 et 2 après l’ajout de m0 - m : la masse totale m = ∑mi
x2 = K2A2 / ∑ KiAi et x’2 = K2A’2 / ∑ KiA’i
d’où : x2 = x’2.A2/A’2 x ∑ KiA’i / ∑ KiAi
pour déterminer ∑ KiA’i et ∑KiAi , on utilise un autre constituant (ici le 1) ∑ KiAi = K1A1/x1 et ∑ KiA’i = K1A’1/x’1
On en déduit x2 = A2A’1/A’2A1.x1/x’1.x’2
Il reste à éliminer x1 et x’1
x2 = m2/m
x’2 = (m2 +m0)/(m+m0)
x1 = m1/m
x’1= m1/(m+m0)
on en déduit que
x2 = (A2.A’1)/(A’2A1-A2A’1).m0/m
L'inconvénient de la méthode des ajouts dosés réside dans le fait qu'il faut disposer du produit pur pour effectuer l'ajout.
