cours sur le chapitre 3
1 Les grandeurs de rétention
1.5 Chromatographie de partage
chromatographie liquide-liquide
La chromatographie de partage est la méthode la plus employée actuellement en HPLC.
Principe de la chromatographie de partage
La phase stationnaire et la phase mobile sont liquides.
Elle est basée sur la différence de solubilité du soluté dans la phase mobile et la phase stationnaire. Le soluté se distribue selon le coefficient de partage K = Cs/Cm avec Cs la concentration du soluté dans la phase stationnaire et Cm la concentration du soluté dans la phase mobile
Pour séparer 2 constituants, il faut qu’ils aient des coefficients de partage différents.
Dans les colonnes actuelles, la phase mobile est un liquide « fixé » par liaison covalente sur un support. Ce sont les colonnes greffées.
Chromatographie en phase normale
Les groupements silanols du gel de silice sont greffés par des molécules organiques (liaisons covalentes). Ici les molécules organiques sont polaires. Les greffons sont possibles grâce à la grande réactivité des groupements silanols.
On procède soit à une estérification :
SiOH + ROH SiOR + H2O
Soit à une silanisation
Les principales greffes polaires sont :
-
alkylnitrile : – (CH2)n - CN
-
aminopropyle : – (CH2)3 – NH2
Le solvant est peu polaire
Chromatographie de partage à polarité de phase inversée
La phase stationnaire est apolaire et le solvant polaire. Ce sont des gels de silices comportant des greffons alkyles. Les plus utilisées sont les greffons à 8 et 18 atomes de carbone (colonnes C8 et C18).
La chromatographie d’échange d’ion (HPLC)
Elle consiste à un échange réversible d’ions entre la phase mobile et la phase stationnaire. Cette dernière est porteuse de groupements ionisés fixes et d’ions mobiles assurant l’électroneutralité. Ce type de chromatographie s’adresse au produits ioniques ou ionisables.
Exemples de phases stationnaires en chromatographie d'échange d'ions.
---- fortement acide : -SO3- H+
---- faiblement acide : -COO-H+
---- fortement basique : -CH2-N+(CH3)3 Cl-
---- faiblement basique –N+H(R2)Cl-
La résine doit être préparée suivant la séparation à effectuer et régénérée en fin d’élution.
La chromatographie d’exclusion (ou perméation de gel)
Principe de la chromatographie d'exclusion
Les molécules sont plus ou moins retenues suivant leur taille et leur possibilité de pénétrer dans les pores de la résine. Les grosses molécules qui ne peuvent pas rentrer dans les pores ne sont pas retenues. Les solutés sont élués dans l’ordre des masses molaires décroissantes.